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    和核酸污染說再見,新一代核酸污染清除劑:表清

    2022-06-27

        你是否遇到過檢測實驗室從某個時間開始,熒光PCR檢測結果經常出現陽性,而豬群長時間觀測卻沒有任何問題?

        你可能遇到了實驗室核酸污染問題。


    01

    實驗室污染及影響


        實時熒光PCR技術目前被廣泛運用于疾病的實驗室診斷、篩查等多個方面。長期的PCR實驗,造成目標DNA片段大量累積、合成,不可避免地給實驗室環境帶來核酸污染,由于核酸不會自動降解,因此會在實驗室環境內不斷積聚。

        由于實時熒光PCR技術靈敏度很高,即使少量的目標核酸片段污染,也會被檢測出來,從而出現陽性結果,造成實驗室檢測與臨床一線情況不符。


    02

    常見的核酸污染消除方式

        

        PCR檢測實驗室在運行中,需要預防和消除以往實驗殘留的陽性核酸。

        實驗室紫外照射對祛除核酸污染并不理想,不僅對照射距離和時間有要求,也僅對500bp以上長片段有效,對短片段效果不大,而實時熒光PCR的擴增片段一般在200bp以內。

        實驗室常用的核酸清除劑多為化學試劑,例如84消毒液等含氯消毒劑,其雖然對核酸祛除的效果明 顯,但味道刺鼻,對實驗人員不友好,而且對金屬有腐蝕性,不能處理PCR儀器、移液器、核酸提取儀、離心機等精密儀器,會影響儀器壽命及精密度。下圖1、2為某實驗室長期使用帶腐蝕性的消毒劑,導致設備出現銹蝕和故障的。


    1:生物安全柜長期使用含氯消毒劑進行消毒,導致內部生銹



    2:實驗員錯誤的使用含氯消毒劑對PCR儀內部孔位進行消毒,導致PCR儀損壞


    03

    有沒有更好的去除核酸污染的方法?


        國測生物經過研發,推出新一代酶解型核酸清除劑:表清。



    04

    表清?消除核酸的原理


        表清采用全能核酸酶,快速與單鏈、雙鏈、線狀、環狀、天然或變性等各種形式的DNARNA進行反應,將其降解為35個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。


    05

    表清?的產品優點


      1、無毒無害、無色無味:

        表清是一款酶解型無毒害、無腐蝕、無刺激的核酸清除劑,適用于玻璃、塑料、陶瓷、橡膠、鋼材和金屬等多種材質,成分對人員友好。

      2、作用迅速、耐受性強:

        表清主要成分為全能核酸酶,在工作狀態下,5min即可有效降解2μg的質粒DNA

      3、半衰期短、不易殘留:

        表清混勻后使用,在室溫下將會自然失活,不易殘留。

      4、操作簡單、輕松使用:

        表清混勻后直接噴灑在固相表面,或打濕一次性抹布/紗布后再擦拭精密儀器的固相表面,過5-10分鐘后,可用干凈抹布或紙巾擦拭。


    06

    表清?核酸清除驗證實驗


    6.1 熒光定量方法驗證:

        將陽性質粒,分別與純水、表清200μL200μL的模式混合,反應10min后,各組取200μL提取核酸,與陽性質粒一起進行檢測,結果如下圖3所示:原始的陽性質粒Ct值為22.39,純水反應組的Ct值為22.78,表清反應組沒有Ct值,說明10min內,表清已經完全將陽性質粒降解掉。



    3:表清降解陽性質粒效果圖


    6.2 瓊脂糖凝膠方法驗證

        取5μLPCR擴增產物,分別與5μL核酸清除劑、5μL純水混合,反應10min,立即進行凝膠電泳,結果如圖4所示,反應組1已經看不到明顯的擴增片段,而對照組2能看到明顯的600bp大小條帶。



    4:表清降解PCR擴增產物效果圖


    07

    表清?現場使用展示




    5:對實驗室環境進行噴霧處理




    6:一次性紗布蘸取適量表清對離心機表面進行擦拭處理




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